واحدة من الشركات المصنعة والموردة الأكثر خبرة للثيازوليل الأزرق cas 298-93-1 في الصين. مرحبًا بكم في الجملة ذات الجودة العالية ثيازوليل الأزرق cas 298-93-1 للبيع هنا من مصنعنا. تتوفر خدمة جيدة وسعر معقول.
ثيازوليل الأزرق، المعروف باسم MTT (3-(4,5-ثنائي ميثيل ثيازول-2-yl)-2,5-بروميد ثنائي فينيل تيترازوليوم)، يحتوي على ازدواجية رائعة - فهو أداة حيوية في بيولوجيا الخلية وغرابة كيميائية حربية. يخضع هذا المسحوق البلوري الأصفر لتحول مذهل في الخلايا الحية: حيث تشق إنزيمات الميتوكوندريا المختزلة حلقة التترازوليوم الخاصة بها، وتحولها إلى راسب فورمازان أرجواني غير قابل للذوبان - وهو تفاعل مذهل بصريًا لدرجة أنه أصبح المعيار الذهبي لقياس قابلية الخلية للحياة. ومع ذلك، وبعيدًا عن طاولة المختبر، يكشف MTT عن المزيد من السلوكيات الباطنية؛ يشكل هيكلها البلوري أنماطًا "متعرجة" غريبة تحت المجهر، بينما تسمح لها خصائص الأكسدة والاختزال بالمشاركة في التفاعلات الكيميائية الضوئية الغريبة عند تعرضها لأطوال موجية محددة من الضوء. ومن الغريب أن المركب يُظهر ظاهرة نادرة تسمى "metachromasia" - تظهر ألوانًا مختلفة اعتمادًا على التركيز والبيئة الجزيئية - وهي خاصية استغلها كيميائيو النسيج في السابق لإنشاء أصباغ "ذكية". كشفت الدراسات الحديثة عن دوره غير المتوقع كمثبط ضعيف لبعض إنزيمات السلسلة التنفسية، مما يشير إلى أن كاشف الفحص الموجود في كل مكان ربما كان يؤثر بشكل خفي على العمليات الأيضية ذاتها التي يستخدمها العلماء لدراستها. عند إذابتها في المذيبات العضوية، تعرض محاليل MTT تأثيرًا غير عادي للتبريد الفلوري الذي حير الكيميائيين الفيزيائيين، مما يشير إلى تفاعلات معقدة بين الجزيئات لا تزال تنتظر تفسيرًا كاملاً.
|
الصيغة الكيميائية |
C18H16BrN5S |
|
الكتلة الدقيقة |
414 |
|
الوزن الجزيئي |
413 |
|
m/z |
413 (100.0%), 415 (97.3%), 416 (18.9%), 414 (16.2%), 415 (4.5%), 417 (4.4%), 414 (3.2%), 414 (1.8%), 416 (1.8%), 417 (1.2%), 415 (1.1%) |
|
التحليل العنصري |
ج، 52.18؛ ح، 3.89؛ ر، 19.29؛ ن، 16.90؛ س، 7.74 |
ثيازوليل الأزرقالاسم الكيميائي هو 3- (4,5-ثنائي ميثيل-2-ثيازول) -2,5-بروميد ثنائي فينيل تيترازوليوم، ويُختصر بـ MTT، وهو مركب عضوي مهم. منذ أن أبلغ موسمان لأول مرة عن استخدام تلطيخ MTT لتحديد نمو الخلايا وبقائها على قيد الحياة في عام 1983، تم تطبيق MTT على نطاق واسع في مجالات مثل علوم الحياة والبحوث الطبية وتطوير الأدوية. وفيما يلي شرح مفصل للغرض منه:
MTT هي إحدى الطرق الكلاسيكية لتحديد تكاثر الخلايا. أثناء زراعة الخلايا، يمكن لإنزيمات هيدروجيناز مثل ديهيدروجيناز السكسينات في ميتوكوندريا الخلية الحية أن تقلل MTT الخارجية إلى فورمازان بلوري أرجواني أزرق غير قابل للذوبان، والذي يترسب في الخلية. تفتقر الخلايا الميتة إلى هذه القدرة على الاختزال، وبالتالي لا تنتج الفورمازان. عن طريق إذابة الفورزان في الخلايا وقياس قيمة امتصاص الضوء عند أطوال موجية محددة (مثل 490 نانومتر أو 562 نانومتر) باستخدام قارئ مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) -، يمكن أن ينعكس عدد الخلايا الحية بشكل غير مباشر. ضمن نطاق معين من أرقام الخلايا، تتناسب كمية بلورات MTT المتكونة مع عدد الخلايا، لذلك يمكن تحديد تكاثر الخلايا بناءً على قيمة الامتصاص المقاسة (قيمة OD).
التطبيق في أبحاث بيولوجيا الخلية
يمكن أيضًا استخدام MTT لتحديد سمية الأدوية أو طرق العلاج الأخرى (مثل التشعيع الإشعاعي) على الخلايا المستنبتة في المختبر. من خلال مقارنة قيم OD لمجموعة العلاج والمجموعة الضابطة، يمكن تقييم تأثير الأدوية أو طرق العلاج على نشاط الخلية. كلما زادت قيمة OD، كلما كان نشاط الخلية أقوى؛ على العكس فإنه يدل على أنه كلما ضعف نشاط الخلية أو زادت سمية الخلية. هذه الطريقة لها تطبيقات واسعة في فحص المخدرات، وأبحاث علم السموم، وغيرها من المجالات. على الرغم من أن MTT يستخدم بشكل أساسي لقياس تكاثر الخلايا والسمية الخلوية، إلا أنه في بعض الحالات، يمكن استخدامه أيضًا للمساعدة في دراسة موت الخلايا المبرمج. أثناء عملية موت الخلايا المبرمج، يتغير نشاط الإنزيم داخل الخلية، مما قد يؤثر على قدرة تقليل MTT. من خلال مقارنة الفرق في قيم OD بين الخلايا المبرمج والخلايا الطبيعية، يمكن تحديد حدوث موت الخلايا المبرمج بشكل مبدئي. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن MTT ليست طريقة متخصصة للكشف عن موت الخلايا المبرمج، ويجب تحليل نتائجها بشكل شامل بالتزامن مع طرق الكشف عن موت الخلايا المبرمج الأخرى.
في عملية تطوير الأدوية، يعد اختبار MTT طريقة شائعة الاستخدام لفحص الأدوية عالية الإنتاجية. من خلال احتضان عقار الاختبار مع الخلايا واستخدام اختبار MTT لقياس التغيرات في نشاط الخلية، يمكن فحص جزيئات الدواء النشطة المحتملة بسرعة. تتمتع هذه الطريقة بمزايا التشغيل السهل والنتائج الموثوقة والإنتاجية العالية، ولها قيمة تطبيقية مهمة في المرحلة المبكرة من تطوير الدواء. يمكن أيضًا استخدام اختبار MTT لدراسة آلية عمل الأدوية. من خلال مقارنة التغيرات في نشاط الخلية في ظل ظروف العلاج الدوائي المختلفة، يمكن تحديد تأثير الأدوية على عمليات مثل تكاثر الخلايا وموت الخلايا المبرمج بشكل مبدئي. من خلال الجمع بين تقنيات البيولوجيا الجزيئية الأخرى مثل اللطخة الغربية وقياس التدفق الخلوي، يمكن الكشف عن أهداف الأدوية ومسارات الإشارة بشكل أكبر. في تقييم سلامة الأدوية، يمكن استخدام اختبار MTT لتقييم التأثيرات السامة للأدوية على الخلايا. من خلال قياس التغيرات في قيمة OD للخلايا بعد العلاج بالعقاقير، من الممكن تحديد ما إذا كان الدواء له سمية للخلايا وقوة السمية. وهذا له أهمية كبيرة لتوجيه البحوث قبل السريرية والتطبيق السريري للأدوية.
تطبيق MTT في مجالات أخرى
في الأبحاث المناعية، يمكن استخدام اختبار MTT لتحديد قدرة الخلايا الليمفاوية على التكاثر. من خلال احتضان الخلايا الليمفاوية مع المستضدات أو المنشطات المناعية وقياس التغيرات في نشاط الخلايا باستخدام فحص MTT، يمكن تقييم قدرة الاستجابة المناعية للخلايا الليمفاوية. ولهذه الطريقة تطبيقات واسعة في تطوير اللقاحات والعلاج المناعي ومجالات أخرى. في أبحاث الأورام، يمكن استخدام اختبار MTT لتحديد نشاط الانتشار وحساسية الخلايا السرطانية للأدوية. من خلال مقارنة التغيرات في قيم OD للخلايا السرطانية في ظل ظروف علاج دوائية مختلفة، يمكن فحص جزيئات الدواء ذات التأثيرات المثبطة على الخلايا السرطانية ويمكن تقييم تأثيراتها المضادة للورم-. وهذا له أهمية كبيرة لتوجيه العلاج السريري للأورام. في أبحاث علم السموم البيئية، يمكن استخدام اختبار MTT لتقييم التأثيرات السامة للملوثات البيئية على الخلايا. من خلال احتضان الخلايا بتركيزات مختلفة من الملوثات وقياس التغيرات في نشاط الخلية باستخدام اختبار MTT، يمكن تحديد سمية وآلية عمل الملوثات. وهذا له أهمية كبيرة لتقييم المخاطر البيئية للملوثات البيئية وصياغة سياسات حماية البيئة.
الخطوات التجريبيةثيازوليل الأزرقطريقة:
1: يهضم التربسين خلايا الطور اللوغاريتمي وأجهزة الطرد المركزي ويجمعها بعد انتهائها لعمل معلق الخلية ويضبط تركيزه إلى 5-10 بعدد الخلايا × 104/مل. للمبتدئين، من الضروري جعل الخلايا تصل إلى 5-10 × 104/مل، وفي كثير من الأحيان لا يعرف من أين يبدأ. أنا هنا لأقدم لك طريقة بسيطة لتحديد عدد الخلايا في البداية.
خذ 25 سم 2 المستخدمة عادة لزراعة الخلايا كمثال:
1) كثافة الخلية حوالي 80% ~ 90% (الشكل أدناه يوضح الحالة التقريبية للخلايا عند كثافة 80% ~ 90%). بعد الهضم والطرد المركزي، قم بإزالة المادة طافية، وأضف 3 مل من الوسط لخلطها.
2) خذ أنبوب طرد مركزي معقم جديد سعة 15 مل (للخطوة التالية لتطعيم لوحة 96 بئرًا) واملأه بوسط يبلغ سعته حوالي 9 مل
3) خذ 1 مل من معلق الخلية 3 مل المحضر في الخطوة الأولى، وأضفه إلى الأنبوب العلوي، وقم بعد الخلايا بعد الخلط. في هذا الوقت، يكون بشكل عام 5-10 أو أقل × 104/مل، وهو ما يعادل 5-10 خلايا لكل خلية في 4 خلايا من لوحة عد الخلايا (انظر الشكل أدناه)؛ إذا كان التركيز غير كاف، يجب إضافة تعليق الخلية وفقا لنتيجة العد، ويجب حساب كل قطرة على أنها 50ul.
4) ينبغي تعديل عدد الخلايا وفقا للأغراض المختلفة للتجربة. على سبيل المثال، في تجربة تكاثر الخلايا العامة، يمكن استخدام 2000 خلية لكل بئر (أي ما يعادل كثافة تعليق الخلية 2 × 104/مل)، 5000 إلى 10000 خلية لكل بئر (أي ما يعادل كثافة تعليق الخلية 5 × 104/مل). بالإضافة إلى ذلك، ينبغي أيضًا تحديد عدد الخلايا وفقًا لخصائصها الخاصة، مثل سرعة النمو. على سبيل المثال، قد تكون كثافة الخلايا التي تنمو بشكل أسرع أصغر قليلاً.
2. بعد إعداد تعليق الخلية، امزجه بلطف وأضف 100ul في كل ثقب، بحيث تكون كثافة الخلايا المراد اختبارها 5000-10000/ثقب (تمتلئ فتحة الحافة ببرنامج تلفزيوني معقم).
ملاحظة L: لأن الخلايا سوف تستمر في الاستقرار بعد الخلط، فمن الضروري الخلط بشكل متكرر أثناء عملية التلقيح، مثل الخلط مرة واحدة كل ستة ثقوب، للتأكد من أن كثافة الخلية للتلقيح هي نفسها تمامًا بين الثقوب، وهو أمر بالغ الأهمية لنتائج MTT.
3. ضع لوحة زراعة الخلايا الملقحة في الحاضنة للزراعة حتى تتم تغطية الطبقة الأحادية للخلية بقاع الحفرة (لوحة مسطحة 96 حفرة)، وأضف الدواء بتدرج التركيز. من حيث المبدأ، يمكن إضافة الدواء بعد لصق الخلية بالجدار، أو ساعتين، أو نصف يوم، ولكننا غالباً ما نضيف الدواء بعد ظهر اليوم السابق، وفي صباح اليوم التالي. بشكل عام، يتم تعيين 5-7 تدرجات، 100ul لكل ثقب، و3-5 ثقوب متعددة. فمن المستحسن تعيين 6، وإلا فإنه من الصعب أن تعكس الوضع الحقيقي. يمكن استخدام الشكل التالي كخطوة مرجعية للوحة ذات 96 فتحة.
L بالنسبة للجرعات، يقوم بعض الأشخاص بإضافة الأدوية مباشرةً إلى 96 طبقًا جيدًا بأحجام مختلفة لتكوين تدرج تركيز. لكنني أعتقد أننا يجب أن نحاول خلط تركيزات مختلفة من الأدوية في أنبوب EP، ثم إزالة طاف الثقافة من لوحة 96 بئرًا (والتي يمكن امتصاصها بعيدًا بمسدس التفريغ) وإضافة 100 ميكرولتر من وسط الثقافة الذي يحتوي على تركيزات مختلفة من الأدوية، والتي يمكن أن تضمن دقة تركيز الدواء. وبالإضافة إلى ذلك، تجدر الإشارة إلى أنه إذا تم استخدام هذا الأسلوب، لا تمتص كل محلول ثقافة لوحة 96-جيدا قبل إضافة الدواء. يجب عليك إضافة عينات مباشرة بعد مص جزء منه لتجنب موت الخلايا بسبب جفاف لوحة 96-جيدا.
احتضان مع 4.5% CO2 عند 37 درجة لمدة 16-48 ساعة، ومراقبة تأثير الدواء تحت المجهر المقلوب. ويبين الشكل التالي التدرج الدوائي النموذجي للتسمم الخلوي.
4. أضف 10ul من محلول MTT (5 مجم/مل، أي . 0.5% MTT) إلى كل بئر واستمر في الاستزراع لمدة 4 ساعات. إذا كان الدواء يمكن أن يتفاعل معثيازوليل الأزرقيمكن التخلص من محلول الثقافة بعد الطرد المركزي، ويمكن إضافة محلول الثقافة الذي يحتوي على MTT بعد غسله ببرنامج تلفزيوني لمدة 2-3 مرات.
5. إيقاف الثقافة والاستعداد للانحلال والتبلور.
ردود الفعل السلبية
ثيازوليل الأزرقواسمه الصيني ميثيل الأزرق، وهو مركب عضوي مهم يستخدم على نطاق واسع في الطب والبيولوجيا والكيمياء. في الطب، غالبًا ما يستخدم لعلاج التسمم بالنتريت، والتسمم بالسيانيد، وما إلى ذلك، ويستخدم أيضًا في التشخيص والعلاج المساعد لبعض الأمراض؛ في الأبحاث البيولوجية، يمكن استخدامه كعامل تلطيخ لوضع العلامات على الخلايا أو الأنسجة. ومع ذلك، مثل العديد من الأدوية، قد يكون للميثيلين الأزرق أيضًا سلسلة من الآثار الجانبية أثناء الاستخدام:
الآثار الجانبية للجهاز الهضمي
يعد الغثيان والقيء أحد الآثار الجانبية الشائعة للجهاز الهضمي لأزرق الميثيلين. عندما يدخل أزرق الميثيلين إلى الجسم، فإنه قد يحفز الغشاء المخاطي في الجهاز الهضمي، مما يسبب الغثيان وحتى القيء في الحالات الشديدة. يكون هذا العرض أكثر وضوحًا عندما تكون سرعة الحقن في الوريد سريعة جدًا أو تكون الجرعة كبيرة جدًا. على سبيل المثال، في بعض الحالات السريرية، قد يعاني المرضى من غثيان وقيء كبير بعد فترة وجيزة من الحقن الوريدي السريع لأزرق الميثيلين، مما يؤثر على راحتهم وتجربة العلاج. قد يعاني بعض المرضى من آلام في البطن بعد استخدام أزرق الميثيلين، وقد تختلف درجة الألم حسب الفروق الفردية، حيث تتراوح من الانزعاج الخفيف إلى الألم الأكثر شدة.
وفي الوقت نفسه، قد يكون مصحوبًا أيضًا بالإسهال، والذي قد يكون بسبب تداخل أزرق الميثيلين في التمعج المعوي ووظيفة الجهاز الهضمي، مما يؤدي إلى حركة معوية غير طبيعية وتغيرات في إفراز السائل الهضمي. لا يؤثر حدوث آلام البطن والإسهال على المدى الطويل أو المتكرر على امتصاص العناصر الغذائية للمريض وصحته البدنية فحسب، بل قد يؤدي أيضًا إلى مضاعفات أخرى.
بعد استخدام أزرق الميثيلين، يتحول لون البول إلى اللون الأزرق، وذلك بسبب إفراز أزرق الميثيلين ومستقلباته في البول عن طريق الكلى. بشكل عام، يعتبر هذا التغير في لون البول مؤقتًا ولن يكون له تأثير خطير على الصحة البدنية. لكن في بعض الحالات الخاصة، مثل المرضى الذين يعانون من أمراض الجهاز البولي، قد تتعارض التغيرات في لون البول مع تشخيص المرض، ويحتاج الأطباء إلى إجراء تحليل شامل يعتمد على مؤشرات الفحص الأخرى. أثناء التبول، قد يشعر بعض المرضى بإحساس لاذع في فتحة مجرى البول.
قد يكون هذا بسبب التأثير المحفز للميثيلين الأزرق على الغشاء المخاطي للإحليل، خاصة عندما يكون تركيز البول مرتفعًا أو يتم فرك الغشاء المخاطي للإحليل أثناء التبول، سيكون الإحساس بالوخز أكثر وضوحًا. يمكن أن يسبب هذا العرض بعض الانزعاج للمرضى ويؤثر على حياتهم اليومية.
الآثار الجانبية لنظام القلب والأوعية الدموية
قد يؤثر أزرق الميثيلين على الوظيفة الطبيعية لنظام القلب والأوعية الدموية، مما يؤدي إلى زيادة أو انخفاض في ضغط الدم. عندما تكون جرعة الحقن في الوريد مرتفعة للغاية، قد يعاني المرضى من انخفاض في ضغط الدم، مصحوبًا بأعراض مثل زيادة معدل ضربات القلب وعدم انتظام ضربات القلب. يمكن أن تؤثر التغيرات غير الطبيعية في ضغط الدم على تروية الدم في الأعضاء المهمة مثل القلب والدماغ، مما يزيد من خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية. على سبيل المثال، قد يعاني بعض المرضى المسنين أو المرضى الذين يعانون من أمراض القلب والأوعية الدموية من تقلبات أكبر في ضغط الدم بعد استخدام أزرق الميثيلين، ومن الضروري مراقبة تغيرات ضغط الدم عن كثب وتعديل خطط العلاج في الوقت المناسب.
يعد الخفقان وضيق الصدر أيضًا من الآثار الجانبية المحتملة للقلب والأوعية الدموية التي قد يسببها أزرق الميثيلين. قد يشعر المريض بنبض سريع وغير منتظم في القلب، أو إحساس بالضغط أو الضيق في الصدر. قد تسبب هذه الأعراض القلق لدى المرضى، مما يزيد العبء على نظام القلب والأوعية الدموية. إذا استمرت أعراض الخفقان وضيق الصدر أو تفاقمت، فيجب طلب العناية الطبية في الوقت المناسب لإجراء الفحوصات والعلاج المناسب.
الآثار الجانبية العصبية
الدوخة والصداع من الآثار الجانبية العصبية الشائعة لأزرق الميثيلين. بعد استخدام أزرق الميثيلين، قد يشعر المرضى بالدوار والارتباك في الرأس، أو يشعرون بعدم الراحة مثل التورم والألم في الرأس. قد يؤثر هذا العرض على انتباه المريض وقدرته على التفكير، ويقلل من كفاءة العمل والحياة. قد يكون حدوث الدوخة والصداع مرتبطًا بتأثيرات أزرق الميثيلين على الأوعية الدموية والأعصاب في الدماغ، ولا تزال الآلية المحددة بحاجة إلى مزيد من البحث. في حالات نادرة، قد يسبب أزرق الميثيلين اضطرابات في الوعي مثل النعاس والغيبوبة وما إلى ذلك.
ويرجع ذلك عادة إلى الاستخدام المفرط للميثيلين الأزرق أو أن المرضى لديهم حساسية مفرطة للدواء، مما يسبب تثبيطًا شديدًا للجهاز العصبي المركزي. تعتبر اضطرابات الوعي من الآثار الجانبية الخطيرة التي قد تعرض سلامة حياة المريض للخطر وتتطلب علاجًا إنقاذيًا فوريًا.
الأسئلة المتداولة
1. ما هو استخدام بروميد التترازوليوم الأزرق ثيازوليل؟
يمكن استخدام الثيازوليل الأزرق التترازوليوم الأزرق (MTT) في قياس تكاثر الخلايا. ينتج MTT محلولًا مصفرًا يتم تحويله إلى فورمازان MTT أزرق داكن -غير قابل للذوبان في الماء بواسطة نازعة هيدروجين الميتوكوندريا في الخلايا الحية.
2. هل الثيازوليل الأزرق آمن للتخزين؟
ظروف درجة الحرارة: أغلق المسحوق وخزنه في الثلاجة عند درجة حرارة -20 درجة للحفظ بالتجميد، مما قد يؤدي إلى إطالة مدة الصلاحية بشكل فعال (عادةً 1-2 سنة)؛ للتخزين قصير المدى (خلال شهر واحد)، يمكن حفظه مؤقتًا تحت ظروف تبريد تصل إلى 4 درجات.
-مقاوم للضوء والرطوبة-المتطلبات: مسحوق MTT حساس للضوء- ويجب تخزينه في زجاجات كاشفة بنية اللون أو زجاجات شفافة مغلفة بورق القصدير. وفي الوقت نفسه، يجب إضافة عوامل التجفيف (مثل هلام السيليكا) لمنع المسحوق من امتصاص الرطوبة والتكتل.
3. هل سيتغير لون الثيازوليل الأزرق؟
عندما يظهر المحلول راسبًا أرجوانيًا أزرق اللون أو يصبح لونه داكنًا، فهذا يشير إلى أنه قد تم أكسدته ولا يمكن الاستمرار في استخدامه.
تجنب وضع المحلول في درجة حرارة الغرفة أو في بيئة مضاءة، لأنه قد يفشل بسرعة.
الوسم : ثيازوليل الأزرق كاس 298-93-1، الموردين، الشركات المصنعة، مصنع، بالجملة، شراء، السعر، السائبة، للبيع