كيف يتم تصنيع ريتروتيد

ريتاتروتايد(وصلة:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) عبارة عن ناهض متعدد الببتيد GLP-1R/GIPR/GCGR طويل المفعول تم تصنيعه كيميائيًا، وهو مخصص لعلاج مرض السكري من النوع 2 لدى البالغين وإدارة الوزن والكبد الدهني غير الكحولي/التهاب الكبد الدهني غير الكحولي. تمت الموافقة على إشارة هذا المنتج لمرض السكري من النوع 2 للبالغين للاستخدام السريري في 29 أغسطس 2023. بالإضافة إلى ذلك، فإن طلب التسجيل السريري لمؤشرات الكبد الدهني غير الكحولي/التهاب الكبد الدهني غير الكحولي هو في مرحلة المراجعة النهائية. هناك ثمانية منبهات GLP-1R/GIPR/GCGR قيد التطوير في العالم، وقد حقق Retatrutide من Rita أسرع تقدم وأطلق المرحلة الثالثة من التجربة السريرية في يونيو من هذا العام. في نفس الشهر، أعلنت ريتا أنه تم إصدار بيانات أبحاث المرحلة الثانية من الريتاتروتيد في الاجتماع السنوي لـ ADA، والتي أظهرت أنه بعد 24 أسبوعًا، وصل الريتاتروتيد (1 ملجم، 4 ملجم، 8 ملجم أو 12 ملجم) إلى نقطة النهاية الرئيسية للفعالية. تقييم المشاركين الذين يعانون من السمنة المفرطة أو الوزن الزائد وغير المصابين بالسكري، حيث بلغ متوسط ​​فقدان الوزن 17.5%. ومن بين نقاط النهاية الثانوية، تم تحقيق فقدان متوسط ​​للوزن بنسبة 24.2% في نهاية 48 أسبوعًا من العلاج. لقد قمنا أيضًا بتصنيع الببتيد في المختبر بناءً على الطريقة المنشورة. سيتم وصف طريقة التوليف المحددة بإيجاز، ويمكن إرسال الخطوات المحددة إلينا عبر البريد الإلكتروني.

طريقة 1:
الخطوات التفصيلية لتصنيع ريتاروتيد باستخدام تخليق الحالة الصلبة في المختبر هي كما يلي:
تحضير الكواشف والأدوات المطلوبة: بما في ذلك الأحماض الأمينية، وثنائي كلورو ميثان، وكربونات البوتاسيوم، وهلام السيليكا المتوكسيل، والأسيتونيتريل، والبيريدين، وN- ميثيل مورفولين، ومصدر كلوريد ثنائي إيزوبروبيل إيثيل، وحمض ثلاثي فلورو أسيتيك، وDIPEA، والأحماض الأمينية المحمية من Boc والكواشف الأخرى، بالإضافة إلى أدوات التحريك المغناطيسية. والمبخرات الدوارة وغيرها من الأدوات.
(1) تصنيع الأحماض الأمينية المحمية من Boc: قم بإذابة الأحماض الأمينية المطلوبة في ثنائي كلورو ميثان، وأضف مسحوق كربونات البوتاسيوم، وحرك بالتساوي، وأضف هلام السيليكا الميثوكسيلي، واستمر في التحريك، ثم أضف البيريدين وN- ميثيل مورفولين للحصول على الأحماض الأمينية المحمية من Boc.
(2) تخليق الطور الصلب: يخلط الأسيتونيتريل ومصدر كلوريد ثنائي إيزوبروبيل إيثيل وحمض ثلاثي فلورو أسيتيك معًا، ويقلب بالتساوي، ويضاف الأحماض الأمينية المحمية من نوع Boc المحضرة، ويستمر في التحريك للحصول على منتج تخليق الطور الصلب.
(3) مجموعة إزالة الحماية: قم بإذابة تركيب الطور الصلب في ثنائي كلورو ميثان، وأضف حمض ثلاثي فلورو أسيتيك، وحركه بالتساوي، ثم أضف DIPEA. استمر في التحريك للحصول على تركيب المرحلة الصلبة المحمية.
(4) التنقية: قم بإذابة تركيب الطور الصلب غير المحمي في الماء، واضبط الرقم الهيدروجيني إلى حوالي 9.0 بمحلول هيدروكسيد الصوديوم، ثم اضبط الرقم الهيدروجيني إلى حوالي 5.0 باستخدام حمض الأسيتيك، وأخيرًا ترسيب المنتج النقي مع الأثير.

الطريقة الثانية:
الخطوات التفصيلية لتصنيع ريتاروتيد باستخدام تخليق الطور السائل في المختبر هي كما يلي:
تحضير الكواشف والأدوات المطلوبة: بما في ذلك الأرجينين، الجلايسين، أنهيدريد الأسيتيك، ثلاثي إيثيل أمين، كربونات البوتاسيوم، ثنائي كلورو ميثان، الميثانول، البيريدين، N- ميثيل مورفولين، أنهيدريد الأسيتيك، أسيتات الصوديوم، والكواشف الأخرى، بالإضافة إلى أدوات مثل أدوات التحريك، ومسارات الفصل، مضخات التفريغ والأفران والأعمدة الكروماتوغرافية.
(1) قم بإذابة الأرجينين والجليسين في كمية مناسبة من ثنائي كلورو ميثان، وأضف كمية مناسبة من أنهيدريد الأسيتيك وثلاثي إيثيل أمين، وحركه بالتساوي تحت المحرض.
(2) انقل الخليط المذاب إلى الفرن وقم بتسخينه عند درجة حرارة 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لإستيل بقايا الأحماض الأمينية.
(3) قم بتحييد المحلول المتفاعل مع مسحوق كربونات البوتاسيوم لتحييد حمض الأسيتيك في المحلول لتوليد خلات الصوديوم، ثم استخرج الببتيد الناتج باستخدام ثنائي كلورو ميثان.
(4) اغسل محلول الببتيد المستخرج بالميثانول وقم بالتصفية بمضخة فراغ للحصول على الببتيد الخام.
(5) يذوب الببتيد الخام في كمية مناسبة من البيريدين وN-ميثيلمورفولين، ويضاف كمية مناسبة من أنهيدريد الأسيتيك وخلات الصوديوم، ويقلب بالتساوي تحت المحرض.
(5) قم بترشيح المحلول المتفاعل بمضخة تفريغ، واغسل عجينة الترشيح بالميثانول، ثم قم بالترشيح بمضخة تفريغ للحصول على الرستاروتيد النهائي.

الطريقة الثالثة:
الخطوات التفصيلية لتصنيع ريتاروتيد باستخدام الطرق الكيميائية في المختبر هي كما يلي:
تحضير الكواشف والأدوات المطلوبة: بما في ذلك الأرجينين، الجلايسين، أنهيدريد الأسيتيك، ثلاثي إيثيل أمين، كربونات البوتاسيوم، ثنائي كلورو ميثان، الميثانول، البيريدين، N- ميثيل مورفولين، أنهيدريد الأسيتيك، أسيتات الصوديوم، والكواشف الأخرى، بالإضافة إلى أدوات مثل أدوات التحريك، ومسارات الفصل، مضخات التفريغ والأفران والأعمدة الكروماتوغرافية.
(1) قم بإذابة الأرجينين والجليسين في كمية مناسبة من ثنائي كلورو ميثان، وأضف كمية مناسبة من أنهيدريد الأسيتيك وثلاثي إيثيل أمين، وحركه بالتساوي تحت المحرض.
(2) انقل الخليط المذاب إلى الفرن وقم بتسخينه عند درجة حرارة 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لإستيل بقايا الأحماض الأمينية.
(3) قم بتحييد المحلول المتفاعل مع مسحوق كربونات البوتاسيوم لتحييد حمض الأسيتيك في المحلول لتوليد خلات الصوديوم، ثم استخرج الببتيد الناتج باستخدام ثنائي كلورو ميثان.
(4) اغسل محلول الببتيد المستخرج بالميثانول وقم بالتصفية بمضخة فراغ للحصول على الببتيد الخام.
(5) يذوب الببتيد الخام في كمية مناسبة من البيريدين وN-ميثيلمورفولين، ويضاف كمية مناسبة من أنهيدريد الأسيتيك وخلات الصوديوم، ويقلب بالتساوي تحت المحرض.
(6) قم بترشيح المحلول المتفاعل بمضخة تفريغ، واغسل كعكة الترشيح بالميثانول، ثم قم بالترشيح بمضخة تفريغ للحصول على الرستاروتيد النهائي.
هناك حاجة إلى تفاعلات تركيبية عضوية متعددة للحصول على الجزيء المستهدف. بالإضافة إلى ذلك، تستخدم هذه الطريقة كواشف عضوية متعددة وظروف تشغيل معقدة، وبالتالي فإن التركيب الكيميائي للروتاروتيد في المختبر لا يكون عادةً مناسبًا للإنتاج على نطاق واسع أو التطبيقات الصناعية. بالنسبة للإنتاج واسع النطاق أو التطبيقات الصناعية، فإن الطريقة الأكثر استخدامًا هي تحضير روتاروتيد من خلال طرق التخليق مثل التخليق الحيوي أو تخليق الطور السائل، وهي صغيرة نسبيًا على نطاق المختبر، وسهلة التشغيل نسبيًا، ومناسبة لإعداد كميات صغيرة من المنتجات. . إن الريتاروتيد الذي تم الحصول عليه بهذه الطرق مشابه أو مشابه من حيث البنية والنشاط البيولوجي للريتاروتيد الذي تم تصنيعه بالطرق الكيميائية، ولكنه يتمتع بمزايا الإنتاجية الأعلى وسهولة التحضير. وفي الوقت نفسه، لديهم أيضًا إمكانات تصنيع أفضل وآفاق تطبيق أوسع.

الطريقة الرابعة:
الخطوات التفصيلية لتصنيع ريتاروتيد باستخدام الطرق البيولوجية في المختبر هي كما يلي:
تحضير الجينات والكواشف المطلوبة: الحصول على البلازميدات التي تحتوي على جين الريتاتروتيد من مكتبة الجينات، وتحويل البلازميدات مع الخلايا المتلقية (مثل الإشريكية القولونية)، والحصول على البكتيريا الهندسية التي تحتوي على جين الريتاتروتيد.
(1) زراعة البكتيريا الهندسية: في ظل ظروف درجة الحرارة ودرجة الحموضة وتركيز الأيونات المناسبة، استخدم وسط استنبات لزراعة البكتيريا الهندسية، مما يسمح لها بالتكاثر بكميات كبيرة.
(2) استخلاص الريتاروتيد: يتم سحق البكتيريا الهندسية المزروعة باستخدام الكسارة، ويتم فصل شظايا الخلايا من الريتاروتيد باستخدام طرق مثل الترشيح الفائق والترسيب للحصول على المنتج الخام.
(3) تنقية الريتاروتيد: تتم تنقية الريتاروتيد الخام باستخدام التقنية الكروماتوغرافية للحصول على الريتاروتيد عالي النقاوة.
الكشف والتعرف على الروتاروتيد: استخدم التحليل اللوني السائل عالي الأداء، وقياس الطيف الكتلي، والرنين المغناطيسي النووي، وغيرها من التقنيات للكشف والتعرف على بنية الروتاروتيد المنقى.
تشتمل معادلة التفاعل الكيميائي للتخليق البيولوجي لريتاروتيد في المختبر بشكل أساسي على التفاعلات الكيميائية أثناء عملية التعبير الجيني، بما في ذلك خطوتين: النسخ والترجمة.
النسخ: يتم فتح شريط DNA المزدوج، باستخدام شريط واحد كقالب لتجميع خيوط الحمض النووي الريبي (RNA)، الأمر الذي يتطلب مشاركة بوليميراز الحمض النووي الريبي (RNApolymerase). معادلة التفاعل هي كما يلي:
الحمض النووي المزدوج الذين تقطعت بهم السبل: DNApol → mRNA + DNApol
الترجمة: ترتبط الريبوسومات بالـ mRNA لتصنيع سلاسل الببتيد، وهي عملية تتطلب مشاركة الأحماض الأمينية والطاقة. معادلة التفاعل هي كما يلي:
الريبوسوم + مرنا → سلسلة الببتيد + الناتج المحلي الإجمالي + باي + H2O
سلسلة الببتيد + ATP → سلسلة الببتيد + AMP + PPi
من بينها، يمثل DNApol بوليميراز الحمض النووي؛ يمثل MRNA الرسول RNA. الريبوسومات تمثل الريبوسومات. تمثل سلاسل الببتيد سلاسل متعددة الببتيد. الناتج المحلي الإجمالي يمثل ثنائي فوسفات الجوانوزين. يمثل Pi حمض الفوسفوريك غير العضوي. H2O يمثل الماء. ATP يمثل أدينوسين ثلاثي الفوسفات. يمثل AMP أحادي فوسفات الأدينوزين. مؤشر أسعار المنتجين يمثل بيروفوسفات غير عضوي. تولد هذه التفاعلات سلاسل الببتيد اللازمة لتخليق ريتاروتيد، والتي تتم بعد ذلك معالجتها وتعديلها في مراحل لاحقة للحصول على ريتاروتيد.

ما سبق هو طرق شائعة لتخليق الروتاروتيد في المختبر، ولكل منها مزايا وعيوب ونطاق استخدام مختلف. يستخدم المختبر عادة تخليق الطور السائل وطرق تخليق الطور الصلب للإنتاج على نطاق صغير لأغراض البحث والاستخدام التجريبي؛ من ناحية أخرى، يعتمد الإنتاج الصناعي مزيجًا من التخليق الحيوي وإنتاج الطور السائل/الصلب للإنتاج على نطاق واسع لتلبية طلب السوق. تجدر الإشارة إلى أن هذه الطرق تتطلب تحسينًا صارمًا للحالة ومراقبة العملية لضمان جودة ونقاء المنتج النهائي.