أبروتينين78R2S7، الصيغة الجزيئية C284H432N84O، CAS 9087-70-1، وهو مثبط الأنزيم البروتيني الذي يمكن أن يمنع التربسين والكيموتربسين، ويمنع تنشيط البروتيزومات النشطة الأخرى في البنكرياس والتنشيط الذاتي للتربسينوجين. يستخدم سريرياً للوقاية والعلاج من التهاب البنكرياس الحاد، والنزيف الناجم عن انحلال الفيبرين، والتخثر المنتشر داخل الأوعية الدموية. ويمكن استخدامه أيضًا لعلاج مضاد للصدمات. مثبطات الأنزيم البروتيني هي مواد يمكنها الارتباط بالإنزيمات وتقليل معدل تحلل الركيزة. مثبطات الأنزيم البروتيني ذات الخصائص البروتينية موجودة على نطاق واسع، وقد تم عزل نوعين من مثبطات الأنزيم البروتيني ذات الخصائص البروتينية من فول الصويا: مثبط كونيز التربسين ومثبط باومان بيلك. الأول لديه وزن جزيئي 20-25 كو، في حين أن الأخير لديه وزن جزيئي 8 كو.
|
|
|
المؤتلفأبروتينين(RTI16) يمكن أن يثبط الكينيناز والتريبسين، وهو مثبط طبيعي لبروتياز السيرين غير محدد. وهو عبارة عن بروتين أساسي ذو سلسلة واحدة يتكون من 58 بقايا حمض أميني، مع 3 روابط ثاني كبريتيد متقاطعة -مرتبطة في السلسلة. لفترة طويلة، تم استخدام أبروتينن لعلاج التهاب البنكرياس الحاد. بعد تسعينيات القرن العشرين، بدأ استخدام الأبروتينين المؤتلف في جراحة القلب والصدر لحماية الصفائح الدموية، وتقليل النزيف والإفرازات، وللعلاج السريري للمرضى الذين يعانون من اضطرابات التخثر. ولذلك، توسع حجم سوق الأبروتينين بسرعة وأصبح أحد الأدوية البيوكيميائية المهمة.
توليف
في الوقت الحاضر، مستحضرات البروتين المؤتلف المتوفرة تجاريًا هي بشكل أساسي مقتطفات من أعضاء مثل رئة الأبقار، والتي لها عمليات معقدة وتكاليف عالية. لذلك، من الأهمية بمكان استكشاف إنتاج الأبروتينن المؤتلف باستخدام أساليب الهندسة الوراثية.
عند استخدام نظام التعبير عن الإفراز، يكون إنتاج الأبروتينين منخفضًا بشكل عام، ويكون نشاط المنتج الناتج منخفضًا أيضًا. من خلال التعبير الاندماجي، من المتوقع أن يزيد مستوى التعبير عن البروتين المؤتلف بشكل كبير.
تم إنشاء بلازميد تعبير aprotinn المؤتلف pGrxA BPTI لهذا الغرض، وتم تصميم موقع التعرف على FXa بين شريك الاندماج والأبروتين المؤتلف. بعد التعبير عنه في شكل جسم متضمن، تمت تنقية شريك الاندماج وإعادة طيه بواسطة الترشيح الهلامي. تم استئصال شريك الاندماج بواسطة FXa للحصول على بروتين له نفس نشاط المنتج الطبيعي. من خلال تحسين ظروف التعبير، تم تحسين العائد بشكل ملحوظ مقارنة بأنظمة التعبير السابقة.
تحسين التعبير عن البكتيريا الهندسية:
تطعيم البكتيريا أنبوب الجلسرين على لوحات أجار LB/AMP، والثقافة عند 37 درجة لمدة 20 ساعة، وكشط المستعمرات وتطعيمهم إلى 5 مل من LB/AMP السائل المتوسط عند 37 درجة، 200 دورة/دقيقة، والثقافة بين عشية وضحاها. تطعيم 5% من اللقاح إلى 100 مل من سائل الذرة المتوسطة، والثقافة عند 37 درجة و 220 دورة/دقيقة على شاكر، للحث على 7 ساعات، ثم الطرد المركزي (8000 دورة/دقيقة، 5 دقائق، 4 درجة) لجمع الخلايا البكتيرية. وزن الوزن الرطب للخلايا البكتيرية والكشف عن تعبيرها بنسبة 15% SDS-PAGE.
زراعة خزانات التخمير
زراعة خزانات التخمير:
باستخدام خزان التخمير Biostat الألماني سعة 30 لتر، عند درجة حرارة 37 درجة، مع التحكم في الأكسجين المذاب بنسبة 20%، ودرجة الحموضة 7.0. باستخدام خزان التخمير للتعبير عن بروتين الاندماج، تم الحصول على 260 جم من الخلايا البكتيرية الرطبة من 16 لتر من مرق التخمير، أي حوالي 16 جم/لتر؛ مستوى التعبير حوالي 45٪ ،
تكسير الجدار واشتمال الجسم على الخلايا البكتيرية:
بعد اكتمال الزراعة، جمع الخلايا البكتيرية، وإضافة 1 غرام من الخلايا البكتيرية إلى 10 مل من المحلول A (50 مليمول/لتر تريس حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 8.0، 1 مليمول/لتر EDTA)، وتعليقها جيدًا، ويصوتن الخلايا في حمام جليدي، والعمل لمدة 30 ثانية، والفاصل الزمني لمدة 10 ثوان، والطاقة 400 واط، 30 دورة. نقل السائل إلى أنبوب الطرد المركزي، الطرد المركزي عند 4 درجة و 8000 دورة / دقيقة لمدة 15 دقيقة، والرواسب هي هيئة التضمين الخام.
إعداد الحل إدراج حل الجسم:
اغسل جسم التضمين الخام بمحلول B (50 مليمول/لتر تريس حمض الهيدروكلوريك، الرقم الهيدروجيني 8.0، 1 مليمول/لتر EDTA، 1% تريتون-X100) مرتين، في كل مرة لمدة 0.5 ساعة، أجهزة الطرد المركزي لإزالة المادة طافية، والحصول على هيئات إدراج نقية نسبيا. أضف 1 جرام من الهيئات المتضمنة إلى 5 مل من المحلول C (50 مليمول/لتر تريس حمض الهيدروكلوريك، درجة الحموضة 8.0، 8 مول/لتر من اليوريا، 1 مليمول/لتر EDTA، 5 مليمول/لتر DTT)، احتضان بين عشية وضحاها عند 4 درجة، تفسد وتذوب، الطرد المركزي عند 12000 دورة/دقيقة لمدة 15 دقيقة، وجمع المادة طافية للحصول على محلول حل الجسم المتضمن. الحصول على أبروتينن المؤتلف.
التأثيرات الدوائية:
أبروتينينيثبط التربسين البشري، والإنزيم الحال للفيبرين، والبلازما، وأنجيوتنسين الأنسجة من خلال مجمعات مثبطات الإنزيم العكسي المتكونة بنسبة كيميائية معينة. تلعب البروتياز مع نشاط السيرين دورًا رئيسيًا في نظام كينينوجين كينين فاسوبريسين، والنظام المكمل، ونظام التخثر، حيث يلعب البلازمين وفاسوبريسين البلازما أدوارًا حاسمة.
يمارس Aprotinn تأثيره المثبط عن طريق تكوين مركب بروتياز aprotinn من خلال الجزء النشط من السيرين على الإنزيم. ومع ذلك، عندما يقترن بروتيازات مختلفة، فإنه يظهر ثوابت تفكك مختلفة. الارتباط مع التربسين هو الأقوى (Ki=0.06nmoN)، وهو أحد أقل الثوابت المسجلة في تفاعلات البروتين-البروتين (Laydunski et al. 1974). الارتباط مع إنزيم الفبرين البشري ليس قويًا جدًا. نظرًا لارتفاع قيمة K لمركب مثبط الإنزيم (Ki=1 nmoN)، فقد يكون قابلاً للعكس (Wimann, 1980)، والمركب الذي يرتبط بأنجيوتنسين البلازما البشرية ضعيف جدًا (Ki=30 nmol/l)، ولكنه لا يزال ضمن النطاق العلاجي للأبروتينن (Nakahara, 1983).
لا يرتبط أبروتينن بجزيئات الإنزيمات الحرة فحسب، بل يرتبط أيضًا بالإنزيمات التي ارتبطت بالفعل بمكون ثالث (إذا كان المركز النشط للإنزيم لا يزال يتمتع بقدرة الارتباط). لذلك، يثبط أبروتينن الإنزيمات المحللة للفيبرين الحرة ويمكنه أيضًا تثبيط مركب كيناز سلسلة الفيبرينوليسين الوسيط الذي يتكون أثناء العلاج الحال للخثرة باستخدام كيناز السلسلة (Wimann، 1980).
يعتمد التأثير المضاد لتحلل الفيبرين للأبروتين على تثبيط البلازمين المنشط بواسطة التحلل المائي للبروتين. على عكس المذيبات الاصطناعية المضادة لتحلل الفيبرين، نظرًا لتثبيطه المباشر للبلازمين المفرط النشاط، فإن أبروتينن لا يحمي الركيزة المباشرة (الفيبرين) من التحلل بواسطة البلازمين فحسب، بل يحمي أيضًا الفيبرينوجين والعاملين الخامس والثامن في البلازما، وألفا 2-جلوبيولين في المصل.
في تجارب الصدمة التي يسببها السموم الداخلية وصدمة نقص حجم الدم، يمكن أن يمنع تراسيلول بشكل كبير تنشيط مولد الكينين. (ماسيون وآخرون a1．1972).
يمكن أن يمنع تراسيلول أو يؤخر تطور الوذمة الخلالية الرئوية (صدمة الرئة). ويعتمد تأثيره المثبط على الجرعة - والوقت - (Lorthioir et al., 1973).
أثناء الصدمة، يمكن أن ينتج البنكرياس الإقفاري مادة ببتيدية شديدة السمية، وهي العامل المثبط لعضلة القلب (MDF). يرتبط هذا العامل ارتباطًا وثيقًا بالوفاة بسبب الصدمة.
يمكن اكتشاف MDF في بلازما الفئران والكلاب والقرود والبشر المصابين بالصدمة النزفية والإنتانية والقلبية وصدمة الحروق. يمكن أن يسبب MDF انخفاضًا في انقباض عضلة القلب في جميع حالات النزيف، وفي الوقت نفسه يسبب تقلص أوعية المقاومة الحشوية، مما يؤدي إلى نقص تروية موضعي وإنتاج المزيد من MDF. علاوة على ذلك، بسبب الأضرار السامة التي لحقت بالجهاز الشبكي البطاني، يتأخر تصفيته في مجرى الدم. يمكن أن يمنع Trasylol بشكل كبير إنتاج MDF (Lefer 1984).
الديناميكية الدوائية:
بعد الحقن في الوريد من تراسيلول، الشكل الأصلي للأبروتينينيتوزع بسرعة خلال المرحلة خارج الخلية، مما يؤدي إلى انخفاض سريع في تركيز الدواء في الدم (نصف العمر-حوالي 23 دقيقة).
وبمجرد أن يصل توزيع الدواء إلى التوازن، فإن نصف عمر الانخفاض في تركيز الدواء في الدم بعد 1-4 ساعات من الحقن يبلغ حوالي 150 دقيقة. يبلغ حجم التوزيع الرئيسي (الغرفة المركزية) حوالي 30% إلى 50% من سوائل الجسم.
بعد 24 ساعة من التسريب بجرعة 250000 KIU/h، حقق المريض تركيزًا ثابتًا في البلازما قدره 40-50 KIU/ml. هذا التركيز يعادل حوالي 1 ميكرومول/لتر ويساوي التركيز الطبيعي لمضاد الفبرينوليسين ألفا 2 في البلازما.
يتراكم الأبروتينن في الكلى وبدرجة أقل في الأنسجة الغضروفية. يرجع التخصيب في الكلى إلى ارتباط الأبروتينين بحواف فرشاة الخلايا الظهارية الأنبوبية القريبة، كما يتم إثراء الأبروتينين أيضًا في الليزوزومات البلعمية. نظرًا لألفة البروتين القلوي مع البروتيوغليكان الحمضي، فإنه يتراكم في أنسجة الغضروف (Kaller، 1968).
يعتمد إثراء الأبروتينن في الليزوزومات البلعمية على آلية النقل النشطة للخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية، وبالتالي أيضًا على وظيفة الخلايا السليمة.
التركيزات في الرئتين والطحال والبنكرياس مماثلة لتلك الموجودة في المصل. يكون التركيز أقل في الدماغ والعضلات والمعدة والأمعاء.
لا يدخل تراسيلول فعليًا إلى السائل النخاعي (CSF). لم يتم الكشف عن تراسيلول في السائل النخاعي للكلاب أو الخنازير الغينية أو المتطوعين الأصحاء أو المرضى الذين يعانون من أو لا يعانون من التهابات عصبية.
فقط كمية محدودة جدًا من تراسيلول يمكنها المرور عبر حاجز المشيمة. بعد الحقن في الوريد قبل الولادة، كان تركيز دم الأطفال حديثي الولادة 1/10 من تركيز دم الأم، ولم يجد باحثون آخرون أبروتينن في دم الجنين للأمهات اللاتي تلقين بالفعل تسريب تراسيلول. قد لا تكون المشيمة منيعة تمامًا للتراسيلول، لكن من الواضح أن مرورها هو عملية بطيئة جدًا.
وقد أظهرت الدراسات في المختبر ذلك
أبروتينين، كمركب جزيء صغير يقاوم انحلال الفيبرين، يُظهر خصائص مثبطة مهمة ومحددة للإنزيم. إنه لا يمنع نشاط التربسين بشكل فعال فحسب، بل يعمل أيضًا على نطاق واسع على الإنزيمات المحللة للبروتين الأخرى ذات الصلة، وبالتالي يلعب دورًا مهمًا في تجارب بيولوجيا الخلية. خاصة أثناء تحلل الخلايا والأنسجة وتجانسها، يمكن أن يعمل Aprotinn كمثبط فعال للبروتياز، مما يمنع بشكل فعال التدهور العرضي للبروتينات المستهدفة، وهو أمر بالغ الأهمية للحفاظ على سلامة العينة ودقتها.
يُظهر التأثير المثبط لـ Aprotinn اعتماداً واضحاً على الجرعة، أي أنه مع زيادة تركيزه، يزداد التأثير المثبط لنشاط تحلل الفيبرين أيضًا وفقًا لذلك. تتيح هذه الميزة للباحثين التحكم بشكل أكثر دقة في الظروف التجريبية للحصول على نتائج تجريبية أكثر موثوقية وقابلة للتكرار. وفي الوقت نفسه، يمكن للأبروتينين أيضًا إطالة وقت تخثر الدم، مما يؤكد بشكل أكبر دوره الهام في آلية التخثر. أظهرت التجارب المختبرية أن Aprotinn هو مثبط فعال لمسار التخثر الداخلي ويمكن أن يتداخل مع العمليات الرئيسية في عملية التخثر وينظمها.
في البحوث الحية
وقد أثبت أبروتيني أيضًا تأثيراته الدوائية الفريدة. يمكن أن يمنع بشكل كبير عملية ذوبان جلطة الدم في المختبر، ويطيل زمن نزيف تقليم الذيل في الفئران، ويطيل زمن التخثر في البلازما البشرية. تشير هذه النتائج إلى أن أبروتينن قد يكون له تأثيرات محتملة مضادة للنزيف ومضادة للتخثر. لمزيد من التحقق من صحة تأثيره في الجسم الحي، أجرى الباحثون تجارب على نموذج دائرة قصر شرياني وريدي للفئران. وأظهرت النتائج أن أبروتينين يمكن أن يقلل بشكل كبير من وزن جلطات الدم، مما يدعم إمكاناته كدواء مضاد للتخثر.
باختصار، أثبت الأبروتنين، باعتباره مركب جزيء صغير يثبط انحلال الفيبرين، خصائص مثبطة للإنزيم وتأثيرات دوائية كبيرة سواء في المختبر أو في الجسم الحي. يوفر تطبيقه في تجارب بيولوجيا الخلية للباحثين أدوات قوية، في حين توفر نتائجه في الدراسات التي أجريت على الجسم الحي أدلة مهمة وأساسًا لتطويره كدواء مضاد للنزيف ومضاد للتخثر. في المستقبل، ومع إجراء المزيد من الأبحاث حول آلية عمل أبروتنين والتجارب السريرية، من المتوقع أن نرى تطبيقه على نطاق أوسع في المجال الطبي.
التعليمات
ما هو دواء أبروتينين المستخدم؟
يشار إلى الأبروتينين للاستخدام الوقائي لتقليل فقدان الدم ونقل الدم لدى المرضى البالغين المعرضين لخطر كبير لفقدان الدم بشكل كبير أثناء خضوعهم لعملية تحويل مسار الشريان التاجي المعزولة. (أي جراحة ترقيع الشريان التاجي التي لا يتم دمجها مع جراحة القلب والأوعية الدموية الأخرى).
هل لا يزال أبروتينين موجودًا في السوق؟
كان العامل المضاد لتحلل الفيبرين أبروتينين، وهو مثبط بروتياز السيرين الموجود بشكل طبيعيتمت إزالته من السوق العالمية في أكتوبر 2007.
هل لا يزال أبروتينين يستخدم في جراحة القلب؟
تقر التوصيات الجديدة، التي تم تخفيض تصنيفها إلى الفئة الثالثة (أ)، بأن الأبروتينين يقلل من عدد المرضى البالغين الذين يحتاجون إلى نقل دم ويقلل من إجمالي فقدان الدم والحاجة إلى -إعادة الاستكشاف لدى المرضى الذين يخضعون لجراحة القلب ولكنلا ننصح باستخدامه للحفظ الروتيني ...
ما مدى فعالية أبروتينين؟
الوسم : أبروتينين كاس 9087-70-1، الموردين، الشركات المصنعة، مصنع، بالجملة، شراء، السعر، السائبة، للبيع