واحدة من الشركات المصنعة والموردة الأكثر خبرة للستربتافيدين سيجما cas 9013-20-1 في الصين. مرحبًا بكم في الجملة ذات الجودة العالية streptavidin sigma cas 9013-20-1 للبيع هنا من مصنعنا. تتوفر خدمة جيدة وسعر معقول.
ستريبتافيدين سيجماهو بروتين مُفرز مشتق من بكتيريا Streptomyces avidinii. عادة مسحوق أبيض أو أبيض. يتميز هذا النوع من الستربتافيدين بدرجة نقاء ونشاط عالية، وهو مناسب لمختلف تجارب البحث العلمي وتطبيقات التكنولوجيا الحيوية. لديه درجة عالية من التقارب والخصوصية، ولا يمكنه ربط جزيئات البيوتين تساهميًا لتكوين مجمعات البيوتين الستربتافيدين المستقرة. وهو أيضًا بروتين رباعي يتكون من أربع وحدات فرعية متطابقة. يمكن لكل وحدة فرعية أن ترتبط بجزيء البيوتين، وبالتالي فإن بنية رباعية الستربتافيدين هذه تمنح الستربتافيدين درجة عالية من الثبات والتقارب. ويستخدم على نطاق واسع في مجالات مثل اللوني تقارب، المناعية، ووضع العلامات مضان في التجارب البيولوجية. من خلال الاستفادة من التقارب القوي بين الستربتافيدين والبيوتين، يمكن تحقيق فصل الجزيئات الحيوية واكتشافها وتنقيتها.
يمكن أن يرتبط بأصباغ الفلورسنت والإنزيمات وغيرها من العلامات لتشكيل مجسات بيولوجية. تتمتع هذه المجسات بقيمة تطبيقية واسعة في التجارب البيولوجية، مثل الكشف عن وجود وتوزيع جزيئات حيوية محددة. كما أنها تستخدم في إعداد أجهزة الاستشعار الحيوية، وأنظمة توصيل الأدوية، وغيرها من المجالات. تعمل هذه التطبيقات على توسيع نطاق تطبيق Streptavidin في مجالات البيولوجيا والطب.
|
|
|
1. تعرف على الستربتافيدين
Streptavidin (SA)، وهو بروتين مُفرَز مشتق من Streptomyces avidinii، يبلغ وزنه الجزيئي حوالي 65-66 كيلو دالتون ونقطة تساوي الجهد الكهربي تبلغ حوالي 6.0. وهو عبارة عن بروتين رباعي يتكون من أربع وحدات فرعية متماثلة، لكل منها موقع ربط مستقل للبيوتين - مما يعني أن جزيء واحد من الستربتافيدين يمكن أن يرتبط في وقت واحد بأربعة جزيئات من البيوتين. يصل ثابت التفكك (Kd) بين الاثنين إلى حوالي 10 ⁻¹⁵ M، وهو أحد أقوى التفاعلات البيولوجية غير التساهمية المعروفة ويمكن اعتباره "آلية القفل الجزيئي" الأكثر دقة في الطبيعة.
بالمقارنة مع الأفيدين المشتق من بياض البيض، فهو يتمتع بمزايا لا مثيل لها:
إنه لا يحتوي على تعديلات الغليكوزيل، وهو محايد كهربائيًا بشكل عام، وبالتالي يحتوي على ارتباط غير محدد -منخفض للغاية في ظل الظروف الفسيولوجية، وخلفية تجريبية نظيفة، ونسبة إشارة ممتازة-إلى-ضوضاء. بالإضافة إلى ذلك، فإن مقاومته الممتازة للتمسخ وتدهور الأنزيم البروتيني، فضلاً عن قدرته على تحمل درجة الحموضة الشديدة ودرجات الحرارة المرتفعة (70-80 درجة مئوية) والمذيبات العضوية وعوامل تغيير الطبيعة التقليدية (مثل SDS واليوريا)، قد حلت محل الأفيدين وأصبحت "المعيار الذهبي" بلا منازع في أنظمة ربط البيوتين.
وبهذه الخصائص المتميزة على وجه التحديد، تتألق في مجالات مثل علوم الحياة، والتشخيص المختبري، وفحص الأدوية، والاستشعار الحيوي.
2. اختبار المناعة
يعد التطبيق في مجال الكشف المناعي هو التطبيق الأكثر كلاسيكية والأكثر استخدامًا. منذ تطويره في أواخر السبعينيات، أصبح نظام البيوتين ستربتافيدين (BAS) حجر الزاوية في وضع العلامات المناعية وتحليل التتبع نظرًا لتقاربه العالي جدًا- وتأثيره التضخيم المتتالي. وفقًا للإحصاءات، يستخدم حوالي 85% من محللي اللمعان الكيميائي الشائع طرق الكشف القائمة على BAS، مما يشير إلى موقعهم المهيمن.
2.1 مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)
في ELISA، يمكن اقتران بيروكسيداز الفجل الحار (HRP) أو الفوسفاتيز القلوي (AP) ويمكن توجيه الإنزيم بدقة إلى الهدف من خلال الأجسام المضادة المعززة بالبيوتينيل. يحفز HRP ركائز الإنارة TMB أو DAB أو ECL لإنتاج إشارات كيميائية أو بصرية قوية، بينما يحفز AP BCIP/NBT وPNPP وغيرها من الركائز لإنتاج إشارات ملونة أو تألق كيميائي ثابتة. يمكن أن يرتبط الجزيء المستهدف المحتوي على بيوتينيل بالعديد من الستربتافيدين المسمى، مما يحقق تضخيم الإشارة متعدد المستويات - ويجعل اكتشاف الأهداف منخفضة الوفرة أمرًا ممكنًا. تُستخدم هذه التقنية على نطاق واسع في اختبار ELISA الساندويتش والتنافسي، حيث تغطي سيناريوهات مثل قياس كمية البروتين، واكتشاف الأجسام المضادة، وفحص مسببات الأمراض، وما إلى ذلك.
2.2 اللطخة المناعية للبروتين (لطخة غربية)
في Western Blot، يمكن أن يؤدي الارتباط بالأجسام المضادة الثانوية المعززة بالبيوتين إلى تعزيز شدة إشارة البروتينات المستهدفة بشكل كبير في أفلام النقل. بالمقارنة مع أنظمة الأجسام المضادة الثانوية التقليدية، يمكن لأنظمة BAS تحقيق تضخيم إشارة أقوى بسبب خصائص الارتباط رباعي التكافؤ الخاصة بها. بالإضافة إلى ذلك، نظرًا للارتباط المنخفض غير المحدد للستربتافيدين، يتم تقليل تداخل الخلفية بشكل كبير، مما يجعلها مناسبة بشكل خاص للتحليل الكمي للبروتينات منخفضة الوفرة.
2.3 الكيمياء المناعية (IHC) والكيمياء المناعية (ICC)
إن الستربتافيدين المسمى HRP أو الستربتافيدين المسمى AP هو أداة تضخيم الإشارة المفضلة لـ IHC وICC. يعتبر نظام HRP مناسبًا للتجارب التي تتطلب حساسية كشف عالية للغاية، في حين أن نظام AP مناسب بشكل خاص للأنظمة التي تحتوي على مثبطات HRP (مثل أزيد الصوديوم) أو السيناريوهات التجريبية التي تتطلب-تطويرًا طويل الأمد للألوان واستقرار الإشارة. من خلال ربط مجسات أو أجسام مضادة تحتوي على بيوتينيل مع اتحادات الستربتافيدين، يمكن تحديد موقع الجزيئات المستهدفة بدقة في أقسام الأنسجة أو عينات الخلايا.
2.4 التألق المناعي (IF) والتهجين في الموقع (ISH)
الفلورسين المسمى الستربتافيدين (مثل FITC Streptavidin، PE Streptavidin، APC Streptavidin) هو أداة تصور عالمية لتلطيخ التألق المناعي والتهجين في الموقع. تحتوي علامة FITC على طول موجي للإثارة/الانبعاث يبلغ حوالي 494/519 نانومتر وتُظهر مضانًا أخضر ساطعًا؛ يبلغ الطول الموجي للإثارة/الانبعاث لعلامة PE حوالي 565/578 نانومتر، وهو "المعيار الذهبي" لتحليل قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان؛ تغطي علامة APC الطيف الأحمر البعيد، مما يسهل التصوير متعدد الألوان-. يمكن أن ترتبط علامات الفلورسنت هذه بدقة بالأجسام المضادة التي تحتوي على بيوتينيل أو تحقيقات الحمض النووي لتحقيق تحليل التوطين والكشف الكمي للجزيئات المستهدفة.
2.5 قياس التدفق الخلوي (FACS)
في قياس التدفق الخلوي، يتم استخدام الستربتافيدين المسمى بالفلورسنت (خاصة المسمى PE) للكشف عن مستضدات سطح الخلية الموسومة بالأجسام المضادة المحتوية على بيوتينيل. يوفر سطوعه الممتاز نسبة إشارة عالية للغاية -إلى-ضوضاء، والتي يمكنها اكتشاف مجموعات الخلايا بشكل فعال مع تعبير مستضد سطحي منخفض أو إشارات ضعيفة. إنه كاشف لا غنى عنه في تحليل قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان.
2.6 المقايسة المناعية المرتبطة بالإنزيم (ELISPOT)
يُظهر الستربتافيدين المسمى AP أداءً ممتازًا في ELISPOT وهو مناسب لتحليل الطور -الصلب وأنظمة تلوين الأنسجة/الخلايا. يمكن أن يحفز بشكل ثابت إنتاج الركيزة لإشارات موضعية قابلة للعد للكشف عن إفراز السيتوكينات على مستوى الخلية المفردة.
3. تنقية البروتينات والأحماض النووية
3.1 كروماتوغرافيا التقارب وتنقية البروتين
الستربتوميسين هو المكون الأساسي للتعبئة اللونية المتقاربة. بعد وضع علامة البيوتين على البروتين المراد تنقيته، يتم خلطه مع هلام الستربتافيدين agarose (مثل Streptavidin Agarose/Sepharose)، وسوف يرتبط البروتين المسمى بشكل وثيق بالستربتافيدين الموجود على الحشو. عن طريق الغسيل لإزالة الشوائب، ثم غسل البروتين المستهدف في ظل الظروف المناسبة (مثل غليان SDS-PAGE buffer، أو معالجة SDS بنسبة 0.1%، أو معالجة فورماميد 95%+10 ملي مولار EDTA عند درجة حموضة 8.2)، يمكن الحصول على منتجات عالية النقاء-.
بأخذ الإنتاج الصناعي للأنسولين البشري المؤتلف كمثال،-يمكن لخرزات الستربتافيدين المغناطيسية عالية الجودة ربط أكثر من 1200 بمول من البيوتين الحر لكل مليجرام، ويمكن أن يصل نقاء البروتين المنقى إلى أكثر من 95%.
3.2 الترسيب المناعي (IP) والترسيب المناعي للكروماتين (ChIP)
إن تطبيق الخرز المغناطيسي الستربتافيدين في الترسيب المناعي يحسن بشكل كبير الكفاءة التجريبية. يمكن للباحثين تثبيت الأجسام المضادة التي تحتوي على بيوتينيل على حبات الستربتافيدين المغناطيسية والمشاركة في احتضانها باستخدام المحللة الخلوية.
تلتقط الأجسام المضادة على وجه التحديد البروتين المستهدف والبروتينات المتفاعلة معه، وتشكل مركب "بروتين الهدف للأجسام المضادة ذات الخرز المغناطيسي". يمكن فصله بسرعة تحت تأثير مجال مغناطيسي خارجي، مع عملية بسيطة وحساسية عالية. في تجارب ChIP، تم أيضًا استخدام الخرز المغناطيسي الستربتافيدين لالتقاط مجمعات بروتين الحمض النووي المحتوي على بيوتينيل ودراسة التفاعل بين البروتينات والحمض النووي.
3.3 التجربة المنسدلة
في دراسة تفاعلات البروتين-البروتيني، يمكن للخرز المغناطيسي أن يلتقط بروتينات الطعم المحتوي على أحيائي ثم "يصطاد" البروتينات السابقة التي تتفاعل معها. على سبيل المثال، عند دراسة مسارات الإشارات الرئيسية في الخلايا السرطانية، يتم تثبيت أجسام مضادة محددة تتعرف على بروتين P53 على خرزات الستربتافيدين المغناطيسية ويتم احتضانها مع محلول الخلية السرطانية لإثراء P53 والبروتينات المرتبطة به بشكل فعال. بالمقارنة مع طرق الترسيب المناعي التقليدية، فإن الخرز المغناطيسي IP يتمتع بحساسية وخصوصية أعلى، ويمكنه إثراء البروتينات المستهدفة ذات الوفرة المنخفضة بشكل أكثر فعالية.
3.4 سحب الحمض النووي الريبوزي -لأسفل
تعتبر الخرزات المغناطيسية مناسبة أيضًا لتجارب سحب الحمض النووي الريبي (RNA)-. بعد الارتباط بالخرز المغناطيسي الستربتافيدين، يمكن تحقيقات الحمض النووي الريبي البيرولوجي (biotinylated RNA) التقاط البروتينات التي تتفاعل مع الحمض النووي الريبي (RNA) من ليساتيس الخلية لدراسة شبكات تفاعل بروتين الحمض النووي الريبي (RNA).
3.5 تحضير الحمض النووي المفرد واستخلاص الحمض النووي
يمكن أن يرتبط مع أليغنوكليوتيدات تحتوي على بيوتينيل لتحضير الحمض النووي المفرد الذي تقطعت به السبل والاستخلاص الفعال للأحماض النووية، ويلعب دورًا مهمًا في الاستنساخ الجزيئي والهندسة الوراثية.
4. الكشف عن الإنتاجية العالية وفحص المخدرات
4.1. TR-منصة اختبار FRET
يمكن أن يقترن بمخلبات مضيئة مثل مخلبيات اليوروبيوم لإجراء ربط الإشارة والتقاط الجزيئات في نظام كشف TR-FRET (نقل طاقة الرنين الفلوري المحلول بالوقت-). على سبيل المثال، THUNDER ™ يمكن أن يرتبط الستربتافيدين المسمى باليوروبيوم والمصمم خصيصًا لمنصة TR-FRET التجريبية بثبات بالعديد من الجزيئات المعدلة بيولوجيًا ويستخدم على نطاق واسع في تحليل تفاعل البروتين والفحص الأولي للأدوية المستهدفة.
ويتميز هذا النظام بأنه متجانس وذو إنتاجية عالية-، مما يجعله أداة قوية لتطوير الأدوية الحديثة.
4.2 توصيل الدواء المستهدف
خصائصه المرتبطة بالبيوتين تجعله ناقلًا مثاليًا لأنظمة توصيل الأدوية المستهدفة. من خلال اقتران جزيئات الدواء بالبيوتين والاستفادة من قدرة الارتباط المستهدفة للستربتافيدين، يمكن تحقيق توصيل الدواء بدقة، مما يحسن كفاءة العلاج ويقلل الآثار الجانبية.
4.3 أجهزة الاستشعار الحيوية والرقائق الحيوية
إنها المادة الأساسية لإنتاج أجهزة الاستشعار الحيوية والرقائق الحيوية. من خلال تثبيت الستربتافيدين على سطح الشريحة كعنصر التقاط، يمكن تثبيت مجسات البروتين أو الأجسام المضادة التي تحمل علامة البيوتين عليها، مما يحقق إنتاجية عالية-واكتشاف حساسية عالية-. على سبيل المثال، في الفحص المبكر لرقائق البروتين لأمراض القلب والأوعية الدموية، يتم تثبيت خرزات الستربتافيدين المغناطيسية على ركيزة الرقاقة وتستخدم لربط مجسات البروتين المحتوية على بيوتينيل. يمكن أن يكشف هذا بدقة عن التشوهات لدى المرضى في المراحل المبكرة من المرض وعندما تكون تركيزات علامات الدم منخفضة حتى cTnI بمقدار 0.01 نانوغرام/مل، مما يؤدي إلى تقدم نافذة التشخيص بمقدار 2-3 ساعات مقارنة بطرق التشخيص التقليدية.
5. بيولوجيا الخلية والتصوير
5.1 وضع العلامات على سطح الخلية وفرز الخلايا الفلورية
يستخدم الستربتافيدين المسمى بالفلورسنت (مثل Vari Fluor 488 Streptavidin) على نطاق واسع لوضع العلامات على سطح الخلية وفرز الخلايا الفلورية. يغطي طيف انبعاثه كامل طيف الأشعة تحت الحمراء المرئية والقريبة-، وفي تجارب وضع العلامات على الألوان المتعددة-، يمكنه بسهولة الدخول إلى النواة والبنية السيتوبلازمية، وتسمية البروتينات المستهدفة للتصوير والتحليل.
5.2 تقنية النانو والتجميع الذاتي للمواد
تجعل خصائص الارتباط الرباعي التكافؤ منه "جسرًا" مثاليًا للتجميع الذاتي-للمواد النانوية. من خلال الارتباط المستهدف للبيوتين ستريبتافيدين، يمكن بناء العديد من الهياكل النانوية للأبحاث متعددة التخصصات مثل التصوير البيولوجي والرصد البيئي.
6. الأجسام المضادة للستربتافيدين
مع الاستخدام الواسع النطاق لنظام البيوتين الستربتافيدين، ظهرت مشكلة غالبًا ما يتم التغاضي عنها - قد تتداخل الأجسام المضادة للستربتافيدين الداخلية (ASA) في العينة مع نظام الكشف. لقد وجدت الأبحاث أن ربط ASA بـ SA في نظام التفاعل يمكن أن يؤثر على البناء الصحيح لأنظمة الأجسام المضادة لمستضد معين، مما يؤدي إلى ضعف دقة الاقتران أو الكشف أو نتائج التشخيص.
ولمواجهة هذا التحدي، ظهرت مجموعات الكشف عن الأجسام المضادة للستربتافيدين، والتي يمكن استخدامها للكشف عن ASA الذاتية في عينات المرضى وتجنب تداخلها مع نظام BAS. قامت شركة Roche Custom Biotech بتطوير متحولة ستربتافيدين غير نشطة (Streptavidin rec. inactive, poly)، والتي يمكن إضافتها إلى النظام الحالي دون خطوات إضافية لمنع تداخل ASA والقضاء عليه على وجه التحديد، مما يحسن دقة وخصوصية نظام الكشف.
7. تدخل البيوتين
على الرغم من أن نظام البيوتين الستربتافيدين قوي، إلا أنه يواجه تحديًا متزايد الخطورة - لتداخل البيوتين.
عندما يكون هناك تركيز عالٍ من البيوتين الحر في عينة الاختبار، فإنه يتنافس مع الأجسام المضادة التي تحتوي على بيوتينيل على موقع ربط الستربتافيدين، مما يؤدي إلى نتائج اكتشاف مشوهة.
يمكن أن يؤدي تناول 100 ملغ من البيوتين عن طريق الفم إلى ذروة تركيز البلازما عند 375-450 نانوغرام / مل. يمكن للمرضى الذين يعانون من مرض التصلب المتعدد تناول 300 ملغم / يوم عن طريق الفم، ويمكن أن تتجاوز مستويات البيوتين في البلازما لديهم 1000 نانوغرام / مل؛ يمكن أن يؤدي تناول 500 ملغ من البيوتين يوميًا إلى تركيزات عالية للغاية من البيوتين في الدم. في المقايسات المناعية الساندويتش، يمكن أن يؤدي الإفراط في تناول البيوتين إلى نتائج منخفضة خاطئة؛ في المقايسات المناعية التنافسية، يمكن أن يؤدي إلى نتائج عالية خاطئة.
أظهرت العديد من الدراسات أن اختبارات هرمون TSH وثيروكسين PTH والغدد الصماء مثل الهرمون الموجه لقشر الكظر والبرولاكتين والتستوستيرون والكورتيزول، بالإضافة إلى علامات الأورام وعلامات وظائف القلب، تتأثر جميعها بدرجات متفاوتة بتداخل البيوتين. أصدرت إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) على التوالي معلومات تحذيرية وإرشادات مقابلة. تتضمن استراتيجيات المواجهة ما يلي: التخفيف المتسلسل للعينات، والتحول إلى طرق غير BAS مثل التحليل اللوني السائل -وقياس الطيف الكتلي، وإعادة الاختبار بعد إزالة البيوتين (في فترة قصيرة تصل إلى ساعتين، أو حتى 15 يومًا أو حتى شهرًا)، أو استخدام كاسحات البيوتين المجانية.
التعليمات
أين يتم التعبير عن الستربتافيدين؟
تم العثور على ما يقرب من 95٪ من الستربتافيدين الذي يتم التعبير عنه في الإشريكية القولونية كجسم متضمن. يتطلب البروتين المعبر عنه في شكل جسم متضمن خطوات إضافية لعملية الطي المتعلقة بتنقيته.
لماذا يتم استخدام الستربتافيدين في ELISA؟
يتم استخدام الأجسام المضادة الثانوية المحتوية على بيوتينيل والستربتافيدين-HRP بشكل شائع في اختبار ELISA لتحسين حد الاكتشاف (LOD). الستربتافيدين هو بروتين رباعي القسيمات يبلغ وزنه الجزيئي 60 كيلو دالتون؛ لديه ارتباط عالي بالبيوتين (في نطاق الفيمتومولار المنخفض) وأربعة مواقع ربط للبيوتين.
ما هي استخدامات الستربتافيدين؟
الستربتافيدين هو بروتين رباعي القسيمات يستخدم عادة في التكنولوجيا الحيوية كرابط مستقر بسبب ارتباطه القوي بجزيئات البيوتين. فهو يشكل رابطة مستقرة جدًا في ظل-ظروف بيولوجية محفوظة جيدًا ويستخدم غالبًا في مخططات الاقتران.
هل الستربتافيدين مضاد حيوي؟
تم العثور على الستربتافيدين لأول مرة كمضاد حيوي وتضاءل تأثير المضاد الحيوي بسبب تناول كمية زائدة من البيوتين. لذلك، قمنا بدراسة تأثير البيوتين على التأثير المثبط للمناعة للستربتافيدين.
الوسم : ستريبتافيدين سيجما كاس 9013-20-1، الموردين، الشركات المصنعة، مصنع، بالجملة، شراء، السعر، السائبة، للبيع